本文标题："氧化物酶体或溶酶体的浮力密度梯度溶液纯化实验"
发布者：yiyi ------ 分类: 行业动态 ------
人浏览过-----时间：2016-11-12 23:59:23
氧化物酶体或溶酶体的浮力密度梯度溶液纯化实验
差速离心有两个问题：低回收率和沉淀中小颗粒的污染。例如在第
一步中，在样品顶端的核至少是最先暴露在低转速下，要运动最长
的路径，因此它们不会在离心过程中成为稳定沉淀的组分。另外，
小颗粒(如线粒体)，一开始紧靠着管子的底部，运动的路径最短，
暴露在最高的转速下，会成为沉淀组分。由于较长的沉降路径以及
导致的g。i。与g。。。之间最大差距，使得吊桶式转子中这些问
题最为严重。而体积相同的固定角转子沉降路径更短，推荐用于差
速离心。
小颗粒物质对于沉淀的污染可以通过“洗涤”过程来减少。这
包括将沉淀重悬于匀浆介质中再离心，合并两种上清用于下一轮离
心。有时候要重复洗涤。而洗涤过程又有它自身伴随的问题：除非
进行沉淀重悬时非常轻柔(在宽松配置的Dounce匀浆器中更佳，使
用研杵少许研磨)，否则沉淀中的细胞器本身会破碎。这也是相当
费时的。
尽管如此，在不少的情况下差速离心是唯一的纯化方法，从大
鼠肝脏或牛心脏中制备所谓的“重线粒体组分”就是其中之一。在
这个例子中，在“对线粒体友好的介质”提供的等渗条件下，能够
快速地进行差速离心以产生一定纯度线粒体组分的，对于保留偶联
的氧化磷酸化来说至关重要。使用密度梯度溶液可以增加纯度，但
是时间的增加，以及由于密度梯度溶液离心时增加的流体静压和高
离心力对细胞器的应力，都会严重损伤线粒体的功能完整性。
仅仅从差速离心根据颗粒大小来分离这个角度来说，它也十分
重要。比如说过氧化物酶体或溶酶体的浮力密度梯度溶液纯化就一
直用于轻线粒体组分分离(见实验方案4．8)排除可能具有相似密度
的较小颗粒。也因为同样的原因，完整的高尔基膜复合体可以相似
地以50009离心力从肝脏匀浆液中纯化出来。另一方面，匀浆液中
大的快速沉降颗粒除非预先除去，不然可能干扰用于分离小的低密
度颗粒的浅层梯度溶液。
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