本文标题："不复染切片反差太弱，电子显微镜照片结构会模糊"
发布者：yiyi ------ 分类: 行业动态 ------
人浏览过-----时间：2016-11-14 19:48:38
不复染切片反差太弱，电子显微镜照片结构会模糊
后固定
后固定一般用俄酸，超薄切片经铀—铅复染后电镜观察。但复
染除有模糊重要细节的危险外．复染溶液对细胞化学反应产物有剧
烈的作用。Lewis和Knight(1977)曾在肾上腺髓质进行乙酰胆碱酯
酶(ACHE)反应，一张切片不复染作对照，一张切片用枸橼酸铅室温
染5mia，结果每个轴突周边的大部分有增强的AChE染色。一张切片
用醋酸双氧铀酒精溶液60℃染10rain，大部分AChE反应产物从轴突
上脱掉。所以，电镜酶细胞化学应避免进行复染，只有确证复染不
干扰其结果的情况下，才采用复染以提高反差。
不复染的切片反差太弱，电镜照片结构模糊。Karnovsky(1964
)用亚铁氰化钾还原饿酸代替一般5我酸进行后固定，可获得较好的
反差，避免了复染。后固定时配制3％亚铁氰化钾水溶液(现配现用
)和2％饿酸水溶液(常规电镜保存液)，两液等量混合，立即用于后
固定。4℃或室温下固定时间在1h以内。时间太长，有的反应产物
也会被溶解。后固定后要充分漂洗，再保存于二甲呻酸钠缓冲液中
，4℃可保存几天再包埋。
脱水、包埋、超薄切片
1．脱水
按常规电镜技术进行脱水，但脱水时间比常规要短些，尤其是
在低浓度酒精或丙酮中停留的时间要短些，以免某些反应产物被溶
解掉。
2．包埋
对于用倒扣包埋法进行电镜酶细胞化学反应，一般在玻片上进
行孵育反应，脱水后，把包埋剂直接滴在光镜下已确定的酶反应部
位进行渗透，再在2号胶囊中装满包埋剂，把胶囊倒扣在反应部位
进行聚合，聚合完后，可用二种方法把胶囊从玻片上取下来，一种
方法是把玻片放在酒精灯上烤，烤至合适温度，
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