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本文标题:"固相萃取(SPE)是-种非常重要的样品制备技术"

发布者:yiyi ------ 分类: 行业动态 ------ 人浏览过-----时间:2017-7-3 19:7:18

 固相萃取(SPE)是-种非常重要的样品制备技术

 
    固相萃取法
    固相萃取法(SPE)是-种非常重要的样品前处理技术,具有高度
自动化、高回收率和卓越选择性等特点,商品化的小型固相萃取设
备和广泛选择性的吸附材料增加了固相萃取法的吸引力,固相萃取
的主要优点是几r在加入较少量溶剂的情况下同时对多个样本进行
提取从原理来说,固相萃取也是一种色谱技术,被分析物选择性吸
附于吸附剂上,而不能吸附的物质流出二先用清洗剂去除杂质(如
苯酚一氯仿可从核酸混合物中将蛋白洗脱出来),同时保留目标分
析物,再使用另一种洗脱液(如Tris—EDTA缓冲液)回收核酸。原则
上,高效液相色谱、阴离子交换色谱以及SEC中所用的吸附剂均可
用于固相萃取。固相萃取仪器配有30~100μm较大孔径的吸附剂,
以及较短的柱长.因此需要的压力较小。通常,吸附剂是比较纯的
二氧化硅,不含可与DNA结合的金属化合物;
 
    传统的固相萃取是一次性使用的试剂盒,其中装有50~500rag
固相吸附颗粒,被固定在两聚乙烯块之间,
    还有一种新的特异性结合方法涉及三股螺旋亲和捕获技术。三
股螺旋已被证明是一种DNA寻靶的有效方法,这项技术最初在生产
基因治疗阶段质粒时发展起来,可以使基冈产物量按比例增大。这
种方法同样适用于较小规模的高通量分析系统。这项技术用到了一
种结合了小的寡核苷酸片段的亲和性基质,这些片段通过氢键与双
链DNA上双螺旋大凹槽上特定区域相结合,基于嘧啶寡核苷酸与DNA
双链上的嘌呤特异性结合,形成局部的三重螺旋结构。与DNA双螺
旋大凹槽结合的嘧啶寡核苷酸平行于双链DNA上的嘌呤,这是通过
两者之间胡思坦氢键实现的。基质的结合特性可通过改变洗脱缓冲
液或化学修饰来改变,三股螺旋捕获技术已经用于重组DNA的富集
和筛选以及从溶菌产物中分离PCR产物和质粒DNA。

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