本文标题："显微镜带有自动照像设备-图像型科研仪器"
发布者：yiyi ------ 分类: 行业动态 ------
人浏览过-----时间：2017-7-11 0:41:24
显微镜带有自动照像设备-图像型科研仪器
在观察过程中荧光会有所减弱，当然如果将材料浸人抗减退
试课剂，如Vectashield，可以大大减少这种荧光的减弱。因此尽
快地拍摄记录下图像是十分重要的。由于用于激发DAPI的高能量的
短波长光，例如近UV／紫色，要比用于显示德克萨斯红和罗丹明的
较低能量的长波长光更快地使荧光染料漂白，因此建议首先拍摄红
色荧光信号然后再拍摄绿色荧光，最后是蓝色荧光图像。拍摄ISH
荧光可能比较困难，因为通常荧光信号仅占图像框的一小部分，并
且背景黑暗。如果显微镜带有自动照像设备，它是根据整个拍摄视
野的光来计算曝光的，取的是荧光和周围黑暗区域的平均值。因此
会使照片曝光过度。使用点测量设备或者在照相机上的暗视野设置
，或是手动控制曝光时间，这个问题即可迎刃而解。还有一种办法
，即在预期曝光设置以下至少选两个设置曝光。对于明亮的ISH信
号，其曝光时间大概在10-30s左右。对于较弱的信号，例如低拷贝
探针的信号，可能曝光时间要达到5min。DAPI图像通常比ISH信号
亮得多，则仅要曝光数秒即可。·
·阳性对照 阳性对照是用来证明所使用的变性、杂交及检测
试剂均反应正常。
如果阳性对照反应正常而试验的载玻片却失败，就表明试验用
的探针有问题，
并非是ISH反应本身的问题。阳性对照包括那些靶序列已知在
试验材料中以
多拷贝存在的探针，如核糖体DNA探针。
·阴性对照
——用来确定非特异性标记的程度。不使用任何探针或者用一
个在试验材料中
不存在的不相干的探针，或者用未标记的目的DNA序列进行实
验
——用来确定探针杂交的特异性。在不同的严紧性条件下进行
实验。
随着严紧性的增加，杂交位点的数量会减少。在较高的严紧性
条件下，留下
的只有那些与目的序列相对应的特异的杂交位点疑难解答
由于ISH的时间较长，步骤较多，不可避免地会产生很多问题
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