本文标题："沉淀物凝胶的孔径微观计量图像显微镜技术"
发布者：yiyi ------ 分类: 行业动态 ------
人浏览过-----时间：2018-3-27 17:28:32
沉淀物凝胶的孔径微观计量图像显微镜技术
凝胶的孔径范围和分子筛性质可以简单地通过控制单体和交联剂的
浓度而得到。比如在7．5％胶浓度(单体和二聚体的总和)中，单体与交
联剂浓度之比为95：5时，将得到5nm大小孔径。而在相同比例下，胶浓
度为30％时，孔径为2nm。如果控制单体与二聚体的比例，甚至还可以
控制用于蛋白质分离的特定孔径。
由于在设计聚丙烯酰胺介质特性时具有很好的灵活性，使得这种介
质电泳成为分析蛋白质的非常有力的工具。与色谱技术不同的是电泳中
的凝胶不呈粒状，而是一种取决：尸模子(平板或柱状)形状的连续体系
。实际上凝胶聚合物分子呈网状结构，由缓冲液包围着，并且网状结构
框架中的一些“孔”亦由缓冲液填充。当在两极间外加电压时，蛋白质
分子与缓冲液中的阴阳离子分别向合适的电极移动。在移动过程中有摩
擦存在，摩擦力的大小与凝胶孔径大小及带电粒子的半径相关，这意味
着除了净电荷及质量影响外，分子筛效应也影响蛋白质的分离效果。
一旦蛋白质显著分离，凝胶即从系统中取出，这时有必要采用高氯
酸或三氯醋酸将蛋白质沉淀来固定蛋白(Mackie，1980，1990；Laird等
，1982)。然后，采用合适的染料对胶进行染色以使这些被固定的蛋白
能被观察到(通常染色剂采用溶于乙醇、乙酸和水混合溶剂中的考马斯
亮蓝，上述溶剂比例是25：8：67)。染色结束后，采用同样溶剂洗涤凝
胶，将未被结合的染料洗去，使蛋白呈现蓝色带状(如在清水背景下可
呈现蛋白质分离轮廓)。所有采用凝胶作为支持介质的电泳体系都需要
固定和染色步骤，因为能满足电泳要求的蛋白质必须是水溶性的并且能
很好地被固定和观察，因此它们必须首先采用沉淀法从溶液中分离出来
，然后采用合适的染色步骤以便被观察到(Rehbein等，1995)，随后对
胶的检查可以目测或采用光密度计或图像分析仪测量蛋白质在分离图谱
中的位置及浓度。
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