本文标题:"荧光光度分析仪器检测水中含浮游植物的步骤"
荧光光度分析仪器检测水中含浮游植物的步骤
荧光光度分析法
(In Vitro Determination of Chlorophyll a and Pheophytin a in Marine and Freshwater Algae by Fluresence)步骤为:
首先先确定所有采样器具需无残留酸化的物质,取定量的水样体积(依水样的颗粒多寡而定,
过滤后滤纸需呈现淡绿或褐色(外海常需过滤达四公升水样,因浮游植物较稀少;
内陆或湖泊则可降低至一公升以下),
以低压(不超过6 in Hg 即20 KPa)抽气帮浦过滤(时间不得超过10分钟,否则容易破坏细胞降低叶绿素测值)
至玻璃纤维滤纸上,但是不要使用帮埔将滤纸上水样完全抽干。
以镊子将滤纸移离开过滤器,将之折叠,含有颗粒物质的那面在内侧,用吸纸轻轻吸取滤纸上过多的水分,
将滤纸放在培养皿(petri dish) 或其他适合的容器内,若不立即进行萃取,用铝箔纸将容器包裹以避光,
储存于-20℃或-70℃的冰箱中,若储存于冰块中,2至4小时内仍可行,于-20℃的环境下储存不得超过31/2星期。
萃取过程中,为方便萃取,将滤纸浸泡在90%丙酮冰箱内2小时以上,但不超过24小时,将滤纸移出冰箱,
置于黑暗处回温。将均质机组合好,含水、含丙酮的洗涤瓶准备在侧,工作平台上的光线尽可能调暗。
将滤纸自容器中取出,剪成小片状,放入玻璃研磨管内,以玻棒将之推至研磨管底,加入4 mL 90%丙酮
(丙酮:水= 9:1),以500 rpm研磨1分钟,将滤纸片研磨成泥,需注意研磨过程不可过热。
将滤纸泥移入15 mL具螺旋盖的离心管,再用6 mL的90%丙酮(丙酮:水= 9:1),清洗附在旋转杵、及管内的残留物,
此清洗液也注入含滤纸泥的离心管内,盖上螺旋盖,震荡之,将之置于黑暗,直到进行下ㄧ步骤。
研磨下一张滤纸前,用丙酮、用水清洗旋转杵、研磨管及玻棒,为降低试剂级的溶剂使用,
可先用水龙头水清洗后,再用丙酮润湿;空白试验的滤纸留至最后研磨。以675g离心15分钟或1000g 离心5分钟。
取其上澄液。
荧光光度计须依赖分光光度计校正,故校正与检量线的制作不同,而套用的方程式也不一样
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