本文标题:"细胞培植观察用显微镜出售!实验室专用"
发布者:yiyi ------ 分类: 行业动态 ------
人浏览过-----时间:2012-9-14 23:11:16
单株抗体的制作
要在生物体外大量制作单株抗体,就必须先将专门分泌抗体的B细胞移殖到培养皿上,不幸的是,大部分的B细胞一离开生物体就会死亡,无法在生物体外繁殖,连B细胞都养不活了,那能指望B细胞分泌抗体呢?后来科学家发现,世界上只有一种细胞生命力强盛,不管移殖到那里都能活的好好的,那就是「癌细胞」,癌细胞是不正常且快速生长的细胞,可以在培养基(一种含有养份的液体)中大量繁殖,如果将B细胞可以分泌抗体的特性与癌细胞生命力强盛的特性结合起来,就可以在培养皿上大量制作单株抗体了。
单株抗体的制作方法是先将B细胞与骨髓癌细胞融合成一个细胞,称为「融合瘤」,如**图16-7(a)所示,在融合的过程中B细胞与癌细胞的基因会重组,所以融合瘤含有B细胞与癌细胞基因重组后的染色体,同时具有B细胞与癌细胞的特性,可以分泌抗体,又可以在培养皿中大量繁殖。融合瘤的制作流程如下:
>PEG细胞融合
将抗原(病毒)注入小白鼠体内,再取出脾脏(含有大量的B细胞),并且将脾脏细胞与癌细胞混合,加入PEG试剂进行细胞融合,PEG试剂是一种化学药品,会将B细胞与癌细胞的细胞膜分解,让B细胞与癌细胞结合成一个融合瘤。
>HAT筛选(Hypoxanthine、Aminopterine、Thymidine)
将融合瘤以HAT培养基(一种含有化学药品的液体)来培养,由于B细胞不容易在生物体外生长,因此会自然死亡;癌细胞虽然很容易在生物体外生长,但是会被HAT培养基杀死;最后只有B细胞与癌细胞结合形成的融合瘤存活下来,如图16-7(b)与(c)所示。
>ELISA筛选(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
并非所有的B细胞都会产生我们所要的抗体,小白鼠原先就存在许多B细胞分泌抗体对抗其他疾病,因此必须使用酵素免疫分析法(ELISA)筛选出我们所要的抗体。
>融合瘤单株化
接着将融合瘤,先稀释分配到96个培养皿中,再以酵素免疫分析法(ELISA)筛选而得到「单株的融合瘤」。
>产生抗体
将单株的融合瘤注入小白鼠腹部,再取出腹水,腹水内就会含有大量的「单株抗体」。
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