本文标题："用于显微镜下所观察荚膜染色法方法的操作流程"
发布者：yiyi ------ 分类: 行业动态 ------
人浏览过-----时间：2012-12-11 18:33:26
荚膜染色法
目的
原理
材料与仪器
步骤与方法
实验注意事项
实验结果
目的
荚膜为细菌所分泌带有黏性之物质，主要附着于细菌之细胞壁并围绕于菌体周围，但并非所有的细菌均可产生荚膜。具有荚膜之细菌，
于宿主体内具有可保护吞噬作用，故含有厚层荚膜之细菌被视为具有毒力且易引起疾病。以化学组成而言，荚膜物质大多为多醣类、醣蛋白或聚胜肽，另外，
荚膜系可溶性物质，故可因激烈冲洗而流失或脱离，因此荚膜染色法较其他各种鑑别染色法更为困难。本实验旨在让学生瞭解荚膜染色之原理并学习细菌的荚膜染色法，以明白菌体之构形。
原理
由于荚膜与染料间的亲合力弱，不易着色。通常会采用负染色法即让菌体和背景着色，而荚膜不染色，而使荚膜在菌体周围呈一透明圈。
由于荚膜的含水量在90%以上，故染色时一般不加热固定，以免荚膜皱缩变化。
材料与仪器
菌种
试剂
设备仪器及其他用具
菌种
培养3~5天之芽胞杆菌（此菌若以甘露醇做碳源之培养基上培养时，芽膜则较厚）。
试剂
1%结晶紫
6%葡萄糖液
墨汁
甲醇
设备仪器及其他用具
酒精灯（或本生灯）
接种环（或接种针）
染色架
滤纸
拭镜纸
玻片
步骤与方法
染色方法之操作流程如下：
制备菌液：先滴入l滴6%葡萄糖液于载玻片一端，接着挑取少量芽胞杆菌菌液与其充分混合，再加入1滴墨水，将三者充分混匀后即为实验用菌液。
制作玻片标本：以左手执玻片，右手另拿一边缘光滑的载玻片，将载玻片的一边与菌液接触，使菌液沿玻片接触处散开，然后以30度角迅速且均匀地将菌液拉向玻片的一端，使菌液呈现薄膜状态。
乾燥：置于空气中使其自然乾燥。
固定：以甲醇浸湿玻片，固定1分钟后将玻片取出并将甲醇倒掉。
染色：将制备完成后之玻片标本置于染色架上，接着滴上结晶紫，以结晶紫染色1~2分钟。
水洗：染色后，将玻片之染色涂抹面向下，以自来水轻洗，直到冲洗出之液体透明无色为止。
乾燥：将玻片上多馀的水分轻轻甩乾，并可利用滤纸将水分吸乾，接着置于无菌操作台内使其自然风乾备用。
显微镜观察：以显微镜进行菌体之观察（可先以低倍找出菌体后，再以高倍观察）。
实验注意事项
加盖玻片时，注意不可有气泡产生，否则会影响观察。
制作玻片标本时，儘可能的要让菌液均匀分布并且不可太厚，否则将影响染色。
乾燥时，不可放于火焰下乾燥。若要放于火焰下乾燥，则需放于火焰较高处进行，不可使玻片发热为原则。
实验结果
请画出于显微镜下所观察到之菌体镜象，并注明各部位的名称。
预期结果：背景灰色，菌体呈现紫色，荚膜则呈现一清晰的透明圈。
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