本文标题："光学显微镜观察辨别其菌体型态-染色方法之操作流程"
发布者：yiyi ------ 分类: 行业动态 ------
人浏览过-----时间：2012-12-12 5:23:59
此染色方法之操作流程如下：
玻片涂抹：取出载玻片，通过酒精灯之火焰，以乳头滴管吸取蒸馏水滴1~2滴于玻片上，并将已灭菌冷却后的接种环沾取上述两种样本菌，将菌体与玻片上之无菌水相互混合均匀至混浊。
乾燥：将玻片置于无菌操作台内自然风乾。
固定：将风乾后的玻片涂抹面向上，并迅速来回通过酒精灯上之火焰2~3次，以使菌体牢固的固定于玻片上后备用。
染色：革兰氏染色法有以下4染色步骤：
初染：将制备好之玻片样本置于染色架上，以1~2滴结晶紫染液染1分钟，之后将染色涂抹面向下，以蒸馏水缓慢冲洗掉多馀的染液（图4-2）。
媒染：将玻片上多馀的水分轻轻甩乾，并以滤纸吸乾水分，再加入碘液，静置1分钟后，将染色涂抹面向下，以蒸馏水缓慢冲洗掉多馀的碘液（图4-3）。
脱色：将玻片上多馀的水分轻轻甩乾，并以滤纸吸乾水分，接着以95%之酒精进行清洗脱色，直至冲洗液之颜色由紫色转变至无色为止，然后再一次进行水洗（图4-4）。此步骤为关键步骤，易影响实验的结果。
当观察到冲洗液的颜色变为无色时即须立刻停止冲洗脱色（切勿脱色过度），由于脱色时间的长短受到多项因素之影响，故脱色时间的控制，需以人为的方式小心的进行。
复染：将玻片上多馀的水分轻轻甩乾，并以滤纸吸乾水分，然后滴数滴沙黄染液于玻片上静置一分钟，之后进行最后一次水洗（图4-5）。
光学显微镜观察辨别其菌体型态：将玻片上之水分以滤纸吸乾，以光学显微镜进行镜检，并加以记录颜色辨别菌体为革兰氏阴性菌（粉红色）或是革兰氏阳性菌（蓝紫色）。
实验注意事项
革兰氏染色过程需进行三次染色及一次脱色步骤，每个步骤如稍有疏忽，皆可能会影响最终之实验结果，因此在实验过程中应谨慎小心并听从任课老师或助教之指导。
革兰氏染色步骤中酒精脱色部分因对实验结果有重大影响，故实验进行时应特别注意。
每项染色步骤中，染剂用量需控制得当不宜过少，且应注意勿使染剂乾枯，当使用蒸馏水冲洗多馀染色液体后，应将残留在玻片上之水滴吸去，再进行下一染色步骤。
革兰氏染色不宜使用培养超过24小时之细菌进行染色观察，以免影响最终之判定结果。
实验结果
请画出以革兰氏染色法染色后之菌体，并以不同颜色来辨别革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌。
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