本文标题："植物染色制备方法-植物细胞观察实验显微镜"
发布者：yiyi ------ 分类: 行业动态 ------
人浏览过-----时间：2017-7-11 17:37:39
植物染色制备方法-植物细胞观察实验显微镜
染色体制备
制备的染色体应除净细胞质和细胞壁碎片；因为这两者都能够
非特异地与探针和检测试剂结合而产生背景信号。我们建议使用铬
酸清洗过的载玻片制备染色体，因为污物和油脂也会产生背景信号
。植物染色体制备方法，连同铬酸清洗载玻片的方法，
使用多线染色体能够提高检测的灵敏度。多线染色体是因核内
重复循环倍增而产生的，每个染色单体都产生很多相同的拷贝。多
拷贝就意谓着一个低拷贝序列重复出现了很多次。在果蝇中多线染
色体己经用于低拷贝序列的定位研究中了(例如Whiting等1989)。
在植物方面，人们已通过6H将重复序列定位于多线染色体上。，但
是还没有人把多线染色体用于定位低拷贝序列。
高分裂中期指数
通常低拷贝序列的检测成功率很低，因此增加每个载玻片上中
期细胞的数目可以提高成功的机会。在植物中累积中期的方法将在
ISH使用的很多探针是通过含有目的DNA序列及载体DNA的质粒
克隆制备的。为了减低背景，应该仅用目的序列作为探针，因为载
体序列能够非特异地结合靶DNA(染色体DNA)而使背景增加。粘粒和
酵母人工染色体(YACs)能够容纳1 Mb的DNA，正越来越多地用于动
物的低拷贝序列的定位，，但在植物中它们的潜力尚未得到发挥。
由于粘粒和YACs的插入很大，因此这种探针还含有很多重复DNA序
列。可以通过在杂交混合液中加入封闭DNA来抑制这些探针与靶DNA
的杂交。
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