本文标题："高解析的低温免疫金电子显微镜技术的应用"
发布者：yiyi ------ 分类: 行业动态 ------
人浏览过-----时间：2016-12-26 0:58:14
高解析的低温免疫金电子显微镜技术的应用
低温免疫金电子显微镜技术
运用高解析的低温免疫金电子显微镜技术定位亚细胞蛋白质／
抗原，此方法可在超微水平上进行局部解剖生化的研究。
运用这种方法最常遇到的染色困难是低质量的切片，缺乏特异
性标记，背景着色深，假阳性，对比弱。差的切片通常由于标本制
备不当或冰冻切片机不稳定。非特异性标记是由于在乙醛固定之后
抗体不能识别抗原；特异性标记最理想的对照是在一类不表达目标
抗原的细胞中过表达该抗原。假阳性常常在运用双标记时出现。在
这种情况下，金颗粒的两侧粘连在一起，之间距离小于20nrn，这
样常常被误认为是只定位。栅格上的污点常常由试剂的磷酸化污染
引起。另外，在免疫孵育过程中切片干燥也会产生污点。
相关的视频光学／电子显微镜术基本方案
这种方法采用免疫金染色法和免疫过氧化物酶染色法来做电镜
标本的染色。通常免疫金染色法常用来标记绝大部分抗原；而免疫
过氧化物酶染色法通常仅用来标记那些位于膜包被的小间隔内的抗
原，这是因为过氧化物酶反应生成的电子致密产物易从抗体结合处
弥散开。只有采用免疫金染色法才能标记位于胞质内的GFP融合蛋
白质的抗原决定簇。此外，HRP(辣根过氧化物酶)标记也适用于其
他的抗原决定簇。
值得一提的是，许多用免疫荧光显示结果非常好的抗体在免疫
源性电镜染色中不甚理想，因为在多数电镜标本的固定过程中用到
的戊二醛很容易与抗原决定簇中的氨基酸基团桥联到一起；然而，
若是减少或者不用戊二醛会造成细胞内细胞器的超微结构无法很好
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