（样品准备）将样品菌液取出后，以 10,000 x g 离心5分钟，加入预先準备的稀释染液,

　

（染色原理）而稀释染液的备制是先将染剂套组内的两种核酸染剂，利用两染剂对细胞膜的穿透能力不同来区分活菌或死菌，其中SYTO 9能穿透完整或受伤的细胞膜进行核酸的标记 ，而propidium iodide 仅能穿透受伤的细胞膜，且会与SYTO 9竞争核酸标记的位置，

　

（染色结果）使死菌或受伤的菌体染成萤光红色；活菌则呈现萤光绿色。

　

（染色步骤）将SYTO 9 和 propidium iodide 做等倍体积混合，再取 3 μl 混合染剂至1ml以0.2 μm滤膜过滤之无菌的 0.5% NaCl 盐水溶液稀释。当菌体在黑暗操作染色处理30分钟后，

　

（观察计数）取菌液置于细菌记数器玻片上，至少取五个以上视野使用萤光显微镜观察照相，细菌记数器玻片深度为0.02 mm乘上一视野的表面积求得菌液的体积，再换算计数成每毫升菌液中的总活菌数目