目的

生物学的研究过程通常需经三个阶段：首先由基础的细胞层次开始，接着进入动物模式，最后再进行ren试验研究；

所以细胞培养技术是现代生物技术研究最基本的实验技术之一。本实验是使用F12 培养液来培养人类横纹肌肉瘤RD 细胞株，

借着实验的操作过程可使操作者熟悉无菌操作与细胞继代培养的相关技术。

 

 

原理

本章节所介绍之细胞培养相关技术有三：

细胞继代培养技术：由于细胞贴附在培养皿上需要钙离子的参与，所以可利用具有螯合钙离子特性的EDTA ，配合胰蛋白酶(trypsin) 的作用，将细胞自培养皿上分离出来。

细胞数及细胞存活率计数技术：死细胞由于细胞膜破损，所以细胞染剂如：锥蓝(trypan blue) 可自由进出细胞膜，因而将死细胞的细胞核染上颜色，但活细胞则否，所以可配合血球细胞计数盘(hemocytometer) ，于相位差显微镜下计算出活细胞数量并估算出细胞存活率。

 

细胞保存及解冻技术：利用抗冻剂DMSO 可以减少细胞于冷冻过程中受到冰晶的伤害，因此在细胞溶液中加入适当比例的DMSO ，则可于液态氮中长期保存细胞株

 

 

材料与器具

实验仪器及用具

实验材料

 

实验仪器及用具

低温保存管(cryotube) （细胞用）及低温保存盒

细胞培养皿(petri dish)

微量吸管及电动吸管(pipette and pipette aid)

血球细胞计数盘(hemocytometer)

相位差显微镜

37℃ 二氧化碳细胞培养箱(CO2 incubator)

恒温水浴槽(water bath)

无菌操作台(laminal flow)

桌上型离心机

液态氮桶

 

实验材料

F12 培养液

二次蒸馏水(ddH2O)

胎牛血清(fetal calf serum ；FBS)

重碳酸氢钠(sodium bicarbonate)

TE(trypsin-EDTA) 溶液

磷酸盐缓冲液(phosphate-buffer-saline ；PBS)

抗生素（penicillin 100,000 IU/L 及streptomycin 100 mg/L ）

细胞染剂(trypan blue solution 0.4%, w/v)

 

抗冻剂(dimethyl sulfoxide ；DMSO)

75% 酒精