本文标题:"用于PCR反应的测试检测用便携光学显微镜"
发布者:yiyi ------ 分类: 行业动态 ------
人浏览过-----时间:2019-3-30 20:43:0
用于PCR反应的测试检测用便携光学显微镜
沉淀DNA的另一种方法是CTAB法。加1/]0体积的5%CTAB,在冰上放置
20分钟,DNA/CTAB在4~C 3000g下离心,去掉上清液,再用70%的乙醇和2
00mM醋酸钠((pH6.0)溶解CTAB,溶液]0000g下离心20分钟,重复上述抽提
过程两次,然后用70%的乙醇冲洗去掉盐分。沉淀经过干燥(5分钟),溶于
1/10XⅧ缓冲液中(Murray&Thompson,1990)。必须注意的是,这些技术不
可能去除所有的杂质,并且可能导致DNA丢失。建议研究者通过扩增反应判
断DNA扩增是否被抑制以判断是否有必要进行第二次纯化过程。29.2 PCR
扩土曾和DNA序歹Q测定
进行基因片段的扩增反应时,古DNA会呈现出特殊的问题,主要由于抑
制因子的存在和DNA模板的片段性(Golenberg,1991,1993)。除了这些限
制外,非常低的DNA浓度,引物的不协调性,非最佳的温度条件和时间设置
等,能经常导致阴性扩增结果。尽管阴性扩增结果常常与缺少内源DNA的结
果一致,但决不能表明样品中没有DNA存在。因此,在定论提取物中完全没
有DNA之前,必须进行仔细的检验。抑制因子可以通过在阳性控制体系中加
一些用于PCR反应的测试抽提液来检测,在阳性控制反应体系中反应产物是
否存在可以反映抑制效应存在与否,部分抑制物的存在会降低产物的量。
另外,由于样品中高度片段化的DNA,在扩增反应中重叠的片段充当引物在
延伸过程中消耗dNTPs和酶的量,这种酶促反应将部分重建破损模板,从而
与目标PCR反应竞争而降低目标PCR的效率,导致低产量的特异PCR产物(
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