概览:

 

Calbiochem所建议的冷冻切片单株和多株抗体可以在冷冻组织切片中用来定位抗原。

 

必要的溶液和试剂:

 

组织切片: 恒低温(cryostat)冷冻切片(4到8微米厚)

胶底溶液(subbing solution): 将0.3% (w/v)明胶和0.05%硫酸铬钾溶于蒸馏水中(若有使用未经涂佈的载玻片)

步骤: 冷冻切片的制备方法

 

使用95%乙醇清理载玻片, 以胶底溶液处理 (或者使用涂佈载玻片), 然后风亁。

从组织块上切下4到8微米厚的冷冻切片(frozen in isopentane precooled in liquid nitrogen, embedded in OCT compound in cryomolds, and stored at -70°C)。

让冷冻切片回到室温(30分钟)。

在冷丙酮中将载玻片固定10分钟然后保持冷藏状态(或者选择另一种固定步骤)。

在PBS中润洗并且更新溶液三次。

使用含有0.1%过氧化氢(H2O2)的PBS溶液孵育5到10分钟以减缓内生过氧化氢酶活性。

在PBS中润洗。

免疫过氧化酶染色法