本文标题："荧光显微镜技术定位荧光动物细胞-图像显微镜"
发布者：yiyi ------ 分类: 行业动态 ------
人浏览过-----时间：2017-3-20 0:38:4
荧光显微镜技术定位荧光动物细胞-图像显微镜
为很多哺乳动物表达质粒中所用的强启动子能引起荧光蛋白过表达
的级联放大效应，并且荧光蛋白的桶状结构可以使其较弱[如水母(
Aequorea victoria)突变体]或者较强[如某些珊瑚和异辐海葵(Dis
co一50ma and Heteractis crispa)突变体]地自我交联。6．开始
实验时，应考虑到整个研究的时间进程。如果实验进程很快，成像
的间隔时间应该很小或为零。在这种情况下，影像扫描和影像收集
也要迅速。由于信噪比会随所收集的光子数目的平方根增加(即扫
描时间越长，信噪比越好)，增加帧频通常可降低信噪比。由于进
程较慢的研究扫描时间更长，并且有更长的时间间隔，因此可以减
少这些限制。两种情况均应考虑整个激发时间以减少光漂白效应。
7．使用传统的荧光显微镜技术定位目的荧光细胞后，首先调节焦
距、激发水平和探测器的捕获能力，在较短的时间内扫描细胞，探
测器可以从感兴趣的焦平面获取足够的信号。要尽可能快地完成这
些步骤，以减轻甚至在实验开始前就开始的光漂白效应。如果最早
一次的成像可行，那么在以后所有的GFP时延性实验中，采用已经
摸索出的设备参数，如扫描时间，激发水平和检波器的捕获和筛检
，保持成像的一致性，或至少可以作为一个良好的起点。8．设置
图像理想的像素大小。许多设备有可选择的范围(64像素×64像素
～2048像素×2048像素)。通常，每平方微米的像素越多，影像就
越清晰；然而，这些高像素的影像在同样的像素设置时间中需要更
长时问的扫描，并且需要更多的储存空间。记住为了使数码影像保
持空问分辨率，应该调整像素的大小到每个可分解单元≥2个像素
。可分解单元(r)取决于物镜的光圈(NA)和激发光的波长Q)(r—o．
61 xz／NA)。9．为每个影像设置理想的扫描时间。像前面提到的
，研究进程的相对速度在一定程度上决定扫描时间。通过改变像素
设置时间(每个像素收集荧光的时间)改变总的扫描时间或者平均一
个像素所需要的时间(多次影像扫描后，单个像素收集的总荧光除
以扫描次数)。简单地说，改变扫描时间在本例中不会引起差别。
然而，如果使用平均像素，则应考虑到与画面平均(重复扫描整张
影像)相对的线平均(用平均的像素重复扫描单一的像素线，进行平
均)与平均画面。在活细胞中，荧光标记的蛋白质可能正在细胞中
运动，而且平均画面像素经过扫描一整张影像所需要的时间在不同
的时间点被收集。这样将会使荧光信号在比平常更大的范围内丢失
。然而，线平均或者改变像素设置时间，以及考虑改变扫描时间和
进展速度可以降低或者消除
这种丢失效应。
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